經(jīng)典液相色譜的流動(dòng)相靠重力緩慢流過(guò)色譜柱，因此固定相的粒徑不能太小(約100微米~ 150微米)。將分離后的樣品分階段收集，然后進(jìn)行分析，這使得經(jīng)典的液相色譜法不僅分離效率低、分析速度慢，而且操作復(fù)雜。直到20世紀(jì)60年代才開(kāi)發(fā)出粒徑小于10μm的高效固定相，并采用高壓輸液泵和自動(dòng)記錄檢測(cè)器，克服了經(jīng)典液相色譜的缺點(diǎn)，發(fā)展成為高效液相色譜，又稱(chēng)高壓液相色譜。

　　凝膠色譜

　　目前，凝膠色譜既適用于水溶液，也適用于有機(jī)溶劑。當(dāng)使用的洗脫液為水溶液時(shí)，稱(chēng)為凝膠過(guò)濾層析，在生物學(xué)中應(yīng)用廣泛。當(dāng)用有機(jī)溶劑作為洗脫劑時(shí)，稱(chēng)為凝膠滲透色譜，在高分子領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。

　　離子交換色譜法

　　離子交換色譜通常使用離子交換樹(shù)脂作為固定相。一般來(lái)說(shuō)，樣品離子與固定相離子發(fā)生可逆交換，由于各組分離器的交換能力不同而實(shí)現(xiàn)色譜分離。

　　分配色譜法

　　這種色譜的流動(dòng)相和固定相都是液體，樣品分子在兩個(gè)液相之間很快達(dá)到平衡分布。這種分離類(lèi)似于萃取過(guò)程，是利用各組分在兩相中分配系數(shù)的差異來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

　　常用的固定劑有β，β’-雙氧(ODPN)、聚乙二醇(PEG400~4000)、三亞甲基二醇(TMG)和角鯊?fù)?SQ)。使用與氣相色譜相同的方法，將固定液涂在多孔載體表面，但在使用中容易流失。目前，鍵合固定相被廣泛應(yīng)用。在這種固相中，固定液沒(méi)有涂覆在載體的表面上，而是通過(guò)化學(xué)反應(yīng)將有機(jī)基團(tuán)結(jié)合到純硅膠顆粒的表面上。

　　例如，可以通過(guò)氯十八烷基硅烷和硅膠表面上的羥基(-OH)之間的反應(yīng)形成烷基化表面。這種固定液的優(yōu)點(diǎn)是不容易被流動(dòng)相侵蝕。在分配色譜中，流動(dòng)相可以是純?nèi)軇?，也可以用混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫，其極性應(yīng)與固定液不同，以避免兩者之間的相容性。