經(jīng)典液相色譜的流動相靠重力緩慢流過色譜柱，因此固定相的粒徑不能太小(約100微米~ 150微米)。將分離后的樣品分階段收集，然后進(jìn)行分析，這使得經(jīng)典的液相色譜法不僅分離效率低、分析速度慢，而且操作復(fù)雜。直到20世紀(jì)60年代才開發(fā)出粒徑小于10μm的高效固定相，并采用高壓輸液泵和自動記錄檢測器，克服了經(jīng)典液相色譜的缺點(diǎn)，發(fā)展成為高效液相色譜，又稱高壓液相色譜。

　　離子交換色譜是一種新發(fā)展起來的現(xiàn)代分析技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的分析，也適用于一些無機(jī)離子(無機(jī)陰離子如NO3-、SO42-和Cl-以及無機(jī)陽離子如Na+、Ca2+、Mg2+和K+)的分離分析，發(fā)揮著非常重要的作用。

　　分配色譜法

　　這種色譜的流動相和固定相都是液體，樣品分子在兩個液相之間很快達(dá)到平衡分布。這種分離類似于萃取過程，是利用各組分在兩相中分配系數(shù)的差異來實(shí)現(xiàn)的。

　　常用的固定劑有β，β’-雙氧(ODPN)、聚乙二醇(PEG400~4000)、三亞甲基二醇(TMG)和角鯊?fù)?SQ)。使用與氣相色譜相同的方法，將固定液涂在多孔載體表面，但在使用中容易流失。目前，鍵合固定相被廣泛應(yīng)用。在這種固相中，固定液沒有涂覆在載體的表面上，而是通過化學(xué)反應(yīng)將有機(jī)基團(tuán)結(jié)合到純硅膠顆粒的表面上。

　　例如，可以通過氯十八烷基硅烷和硅膠表面上的羥基(-OH)之間的反應(yīng)形成烷基化表面。這種固定液的優(yōu)點(diǎn)是不容易被流動相侵蝕。在分配色譜中，流動相可以是純?nèi)軇部梢杂没旌先軇┻M(jìn)行梯度洗脫，其極性應(yīng)與固定液不同，以避免兩者之間的相容性。

　　離子交換色譜法

　　離子交換色譜通常使用離子交換樹脂作為固定相。一般來說，樣品離子與固定相離子發(fā)生可逆交換，由于各組分離器的交換能力不同而實(shí)現(xiàn)色譜分離。