蛋白質(zhì)芯片技術又稱蛋白質(zhì)陣列,是指將大量已知的蛋白質(zhì)固定在經(jīng)過化學修飾的固相載體上。在保留蛋白質(zhì)理化性質(zhì)的基礎上,將蛋白質(zhì)與載體表面結合,然后通過激光掃描系統(tǒng)或感應耦合裝置獲得相關圖像。然后用專門的計算機軟件分析圖像和定性定量結果。Howell等人利用俗稱軟蝕刻的微接觸印刷技術,制作了可以檢測大腸桿菌O157∶H7和沙門氏菌腎細菌的微陣列。結果表明,該芯片與其他有害微生物的交叉反應較少,檢測濃度為7×107cfu/ml,檢測時間為40min,是一種有效的微生物檢測方法。
方震建立了大腸桿菌O157的檢測方法
H7液體蛋白芯片法。通過繪制檢測曲線,將該方法和以H2O為溶劑的液相芯片法分別應用于實際牛肉樣品的檢測。將該方法與細菌分離培養(yǎng)的陽性檢出率進行比較,陽性檢出低濃度為103cfu/ml,檢測下限為100 cfu/ml。與18種腸道細菌無交叉反應,特異性好;實驗重復三次,批間變異系數(shù)為7.61,重復性好;用該方法檢測牛肉樣品中人工添加的細菌,陽性低濃度可檢測為0.5 cfu/ml;用該方法檢測154份實際牛肉樣品,19份呈陽性,16份細菌培養(yǎng)呈陽性。蛋白質(zhì)芯片技術是一種具有高特異性、高靈敏度、高通量、良好重復性, 適用性強,適用范圍廣,小型化。在生命科學的各個研究領域都有很好的發(fā)展前景,但和基因芯片技術一樣,檢測成本高,發(fā)展還不成熟。
納米金標記技術
納米金標記技術是指直徑為1 nm-100 nm的微小金顆粒,具有較高的電子密度、介電特性和催化作用,可與多種生物大分子結合而不影響其生物活性。近年來,基于納米金標記的快速檢測研究已廣泛應用于有害微生物的檢測,檢測的微生物種類繁多。通過處理納米金顆粒的表面特性,在納米金顆粒表面標記特定的寡核苷酸探針,國內(nèi)外科技人員開發(fā)了一種新的微生物檢測系統(tǒng)。
采用氨基偶聯(lián)法將多克隆抗體固定在傳感器表面,以金納米粒子標記的大腸桿菌O157∶H7多克隆抗體作為二抗。采用雙道表面等離子體共振傳感器夾心法檢測大腸桿菌O157∶H7。SPR直接法的檢出限為103cfu/ml,線性范圍為103 cfu/ml-109 cfu/ml。金納米顆粒增強夾心法的檢出限為10cfu/ml,線性范圍為10 cfu/ml-1010 cfu/ml。靈敏度提高了100倍,檢測范圍更寬,檢測時間縮短,選擇性和重現(xiàn)性更好。該技術具有簡單、快速、靈敏度高、特異性強、價格低廉、樣品要求少等優(yōu)點。適用于現(xiàn)場篩選,在飼料檢測中具有廣泛的應用價值和發(fā)展前景。
目前,生物領域的專家通過對微生物快速檢測的深入研究,開發(fā)出了一系列技術,包括ATP熒光檢測器、多功能微生物熒光檢測器、微生物實時光電檢測系統(tǒng)、紙片法等。這些對食品中有害微生物的快速檢測技術,未來也可以用在飼料中。這些方法的應用將為飼料安全提供有力保障,促進我國飼料工業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展。下面重點介紹兩種常用的有害微生物快速檢測設備。
快速微生物檢測系統(tǒng)
高性能便攜式微生物檢測儀綜合了培養(yǎng)皿法、酶法、免疫法、基因法等多種檢測方法的優(yōu)點,具有方便、操作簡單、檢測快速、靈敏度高、特異性強、消耗成本低、可定性半定量測定等優(yōu)點。
快速檢測目標:活菌總數(shù)、大腸菌群、大腸桿菌、腸桿菌科、綠膿桿菌、李斯特菌、腸球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、硫代亞硫酸梭菌、霉菌(、酵母菌、軍團菌等。)可以定量檢測。
快速檢測產(chǎn)品應用廣泛,可用于食品、飼料、醫(yī)藥、水質(zhì)、空氣微生物檢測等多個領域,可檢測固體、液體、氣體、糊狀、漿狀等樣品。易于使用:一個便攜式系統(tǒng)可以完成采樣、實驗、后處理等。,沒有各種檢測儀器。操作簡單:檢測樣品只需1ml或1g,無需預處理,只需3步即可完成操作。靈敏度高:可檢測1cfu數(shù)量級的目標微生物,符合國內(nèi)外微生物檢測標準。特異性高:特異性高達99.999%, 這消除了由非靶微生物引起的實驗干擾。高精度:100%定量分析是可能的。檢測數(shù)量:8個插槽可同時提供8個不同的實驗和13個不同的標準培養(yǎng)環(huán)境??焖贆z測:10分鐘即可得出檢測結果,可用于現(xiàn)場檢測。智能高:能自動控制孵育溫度和孵育時間,并能自動生成實驗報告。全自動:獨立連續(xù)檢測并記錄瓶內(nèi)微生物數(shù)量。
將激光掃描合成成像技術與活細胞熒光酶標記技術相結合,成功研制了快速RDI微生物檢測儀。該儀器可在1.5小時內(nèi)快速計數(shù)可過濾樣品中的微生物和原蟲,適用于食品、飼料、化妝品和制藥行業(yè)。其特點是:只檢測活細胞數(shù),激光掃描后自動讀取整個濾膜,速度極快,無需增菌,90-90—l00min內(nèi)即可出結果;可以選擇熒光顯微鏡連接儀器,自動定位觀察可疑微生物。靈敏度:1可檢出微生物或原蟲;檢測范圍:1-5000個細胞。