微生物限度檢查法(薄膜過濾法)
驗(yàn)證方案
微生物限度檢查法(薄膜過濾法)驗(yàn)證方案
代碼:表
一、核查方案的起草和批準(zhǔn)
1.驗(yàn)證方案草案
起草人:起草期:年月日
2.驗(yàn)證團(tuán)隊(duì)成員:
3.驗(yàn)證方案審計(jì)
4.驗(yàn)證方案批準(zhǔn)
批準(zhǔn)人:批準(zhǔn)日期:
二、驗(yàn)證方案
1.驗(yàn)證的目的和原則
1.1驗(yàn)證目的
為了確認(rèn)所采用的方法適用于該藥品中細(xì)菌、霉菌和酵母菌的測(cè)定，特制定本方案。驗(yàn)證過程應(yīng)嚴(yán)格按照本方案規(guī)定的內(nèi)容進(jìn)行，因特殊原因確需變更的，應(yīng)報(bào)驗(yàn)證委員會(huì)批準(zhǔn)。
1.2原則
通過比較四組試驗(yàn)菌的恢復(fù)生長(zhǎng)結(jié)果，評(píng)價(jià)整個(gè)試驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性、有效性和重現(xiàn)性。
2.驗(yàn)證方法步驟
2.1驗(yàn)證前的準(zhǔn)備:微生物限度檢查法(薄膜過濾法)驗(yàn)證前，應(yīng)對(duì)所有平板和稀釋劑進(jìn)行嚴(yán)格檢查。
按照相關(guān)滅菌程序進(jìn)行消毒，確保不影響檢測(cè)結(jié)果。測(cè)試細(xì)菌應(yīng)包括G-、G+、酵母和霉菌微生物，以基本覆蓋樣品中可能存在的微生物。
2.2驗(yàn)證試驗(yàn)操作方案:用不同批次產(chǎn)品的三種微生物限度檢查方法進(jìn)行平行試驗(yàn)，通過計(jì)算回收率判斷限度檢查方法是否對(duì)產(chǎn)品有影響。
2.3試驗(yàn)結(jié)果的可接受標(biāo)準(zhǔn):用標(biāo)準(zhǔn)菌株評(píng)價(jià)法的微生物限度檢查樣品中微生物的抑制情況，試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)顯示稀釋液對(duì)照組的細(xì)菌回收率不低于70%，試驗(yàn)組的回收率不低于70%。
3.測(cè)試實(shí)現(xiàn)
3.1試驗(yàn)前的準(zhǔn)備
3.1.1主要儀器設(shè)備:生化培養(yǎng)箱、電子天平、高壓蒸汽滅菌器、凈化工作臺(tái)。
3.1.2操作環(huán)境:手術(shù)室應(yīng)安裝空氣除菌過濾層裝置。環(huán)境潔凈度不低于10000，局部潔凈度100(或把凈化工作臺(tái)放在同一水平)。操作室或凈化工作臺(tái)的潔凈空氣應(yīng)保持對(duì)環(huán)境的正壓，不低于4.9pa
3.1.3試樣:
批號(hào):批號(hào):批號(hào):
3.1.4培養(yǎng)基:
3.1.5稀釋劑:PH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液
上述材料經(jīng)115℃高壓蒸汽滅菌30分鐘。
3.1.6用于驗(yàn)證的微生物的名稱和編號(hào)。
實(shí)驗(yàn)菌株來源:
序列號(hào)由細(xì)菌名稱、傳代次數(shù)和制備日期的首字母組成。
3.1.7儀器:無菌濾膜:(孔徑0.45um直徑50mm)，無菌移液管(5ml)。
4.驗(yàn)證方法
4.1菌液的制備
大腸桿菌、枯草芽孢桿菌接種于10ml無菌營養(yǎng)肉湯中，于30～35℃培養(yǎng)18～24h。將白色念珠菌接種于改良馬丁液體培養(yǎng)基中，于23 ~ 28℃培養(yǎng)24 ~ 48。將黑曲霉接種于改良馬丁液體培養(yǎng)基中，于23 ~ 28℃培養(yǎng)5 ~ 7天。用0.9%無菌氯化鈉溶液將上述培養(yǎng)物制成每毫升含50 ~ 100個(gè)fu菌落的菌懸液。
4.2實(shí)驗(yàn)方法
試液的制備:取10g(ml)樣品，加入100ml ph 7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，搖勻使其分散均勻□,用均質(zhì)機(jī)混勻□,置于45℃水浴中使外殼熔化并混勻□,制成1: 10的均勻試液。
樣本測(cè)試組
取10ml 1:10試液(相當(dāng)于1g或1ml試液)，加入100ml稀釋液中，混勻，過濾，用稀釋液沖洗濾膜3次，每次100ml，在*后的沖洗液中加入50~100cfu菌液，過濾后，取出帶菌濾膜，菌面朝上(與細(xì)菌和樣品接觸的面)貼在固化的培養(yǎng)基上。將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌附著在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上；白色念珠菌和黑曲霉附著在玫瑰鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上。
b菌液群
將上述菌液各1ml加入100ml稀釋液中，混勻，過濾，用稀釋液沖洗濾膜三次，每次100ml。過濾后，取出帶有細(xì)菌的濾膜，細(xì)菌面朝上(接觸細(xì)菌和樣品的一面)貼在固化的培養(yǎng)基上。將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌附著在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上；白色念珠菌和黑曲霉附著在玫瑰鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上。
c測(cè)試樣品對(duì)照組
取上述1: 10試液10ml，加入100ml稀釋液中，混勻，過濾，用稀釋液沖洗濾膜3次，每次100ml，過濾后取出濾膜，貼在已凝固的培養(yǎng)基上，接觸樣品的面朝上。將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌附著在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上；白色念珠菌和黑曲霉附著在玫瑰鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上。
d稀釋劑對(duì)照組
用PH7.0的氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液沖洗濾膜三次，每次100ml，最后一次沖洗液中加入50~100cfu菌液，過濾后取出帶菌濾膜，將菌面貼在固化的培養(yǎng)基上。將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌附著在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上；白色念珠菌和黑曲霉附著在玫瑰鈉瓊脂培養(yǎng)基平板上。
4.3文化
大腸桿菌、枯草芽孢桿菌在30 ~ 35℃培養(yǎng)48h，白色念珠菌和黑曲霉在23 ~ 28℃培養(yǎng)72h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。
5.試驗(yàn)結(jié)果
5.1產(chǎn)品試驗(yàn)組微生物生長(zhǎng)檢查:批號(hào):
5.2對(duì)照組微生物生長(zhǎng)檢查:批號(hào):
5.3稀釋液對(duì)照組微生物生長(zhǎng)檢查:批號(hào):
5.4菌液組微生物生長(zhǎng)檢查:批號(hào):
6.回收率的計(jì)算
6.1稀釋液對(duì)照組細(xì)菌回收率
表中:回收率=稀釋液對(duì)照組平均菌落數(shù)÷菌液組平均菌落數(shù)×100%。
6.2試驗(yàn)組細(xì)菌回收率
表中:菌液組回收率=(試驗(yàn)組平均菌落數(shù)-試驗(yàn)對(duì)照組平均菌落數(shù))×100%。
7.結(jié)論:
7.1經(jīng)驗(yàn)證，大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉的回收率分別為%、%、%、%和%。
7.2稀釋劑的回收率為%、%、%、%。
上述驗(yàn)證結(jié)果證明本品采用上述方法進(jìn)行微生物限度檢查。
檢查員:檢查者:
8.驗(yàn)證結(jié)果的評(píng)估和分析
質(zhì)量控制部負(fù)責(zé)記錄驗(yàn)證和試驗(yàn)結(jié)果，驗(yàn)證小組對(duì)驗(yàn)證和試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，起草驗(yàn)證報(bào)告并提交給驗(yàn)證委員會(huì)。
驗(yàn)證委員會(huì)負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)估，做出驗(yàn)證結(jié)論，并簽發(fā)驗(yàn)證證書。驗(yàn)證結(jié)果的評(píng)審應(yīng)包括:
(1)核實(shí)測(cè)試中是否有遺漏；
(2)驗(yàn)證方案在驗(yàn)證實(shí)施過程中是否被修改，修改的原因和依據(jù)，是否得到批準(zhǔn)；
(3)核實(shí)記錄是否完整；
(4)驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果是否符合標(biāo)準(zhǔn)要求，偏差及對(duì)偏差的說明是否合理，是否需要進(jìn)一步補(bǔ)充試驗(yàn)。
9.*最終批準(zhǔn)
驗(yàn)證報(bào)告經(jīng)驗(yàn)證組長(zhǎng)審核后，提交驗(yàn)證總負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)，并簽發(fā)驗(yàn)證證書。
驗(yàn)證報(bào)告
年至年，驗(yàn)證組根據(jù)驗(yàn)證組批準(zhǔn)的驗(yàn)證文件，對(duì)微生物限度檢查法(薄膜過濾法)進(jìn)行了一系列驗(yàn)證工作，取得了預(yù)期的結(jié)果?，F(xiàn)將有關(guān)事項(xiàng)說明如下:
1.驗(yàn)證方案在實(shí)施過程中未被修改。
2.驗(yàn)證方案的性能指標(biāo)在驗(yàn)證過程中沒有發(fā)生變化，誤差在允許范圍內(nèi)。
3.驗(yàn)證過程中的結(jié)果符合規(guī)定的要求，記錄完整、真實(shí)。
4.驗(yàn)證結(jié)果符合設(shè)計(jì)要求和GMP原則，可以投入使用。
5.當(dāng)成分或檢驗(yàn)條件發(fā)生變化時(shí)，需要重新驗(yàn)證。
以上情況，請(qǐng)你委批準(zhǔn)核實(shí)！