基于濾膜直接細菌計數(shù)的細菌總數(shù)快速檢測

　　[摘要]細菌總數(shù)的快速檢測在質(zhì)量監(jiān)控中具有重要意義。目前除了經(jīng)典的平板培養(yǎng)法，還有微菌落法、阻抗法等快速檢測方法，這些方法要么檢測時間長，要么檢測成本高。本研究提出了一種無需培養(yǎng)直接計數(shù)濾膜上細菌總數(shù)的快速檢測方法，主要分為過濾、染色、顯微鏡計數(shù)和計算四個步驟。在計算細菌總數(shù)時，根據(jù)濾膜上細菌的分布特點，對傳統(tǒng)公式進行了改進，提出了按區(qū)域計算細菌總數(shù)的計算方法，提高了檢測精度。結果表明，該方法與傳統(tǒng)平板培養(yǎng)法無顯著差異(t=0.847， p = 0.436 > 0.05)，是一種低成本、快速檢測細菌總數(shù)的方法。

　　1導言

　　有許多關于細菌總數(shù)的研究。目前國家標準規(guī)定的方法是平板計數(shù)法，即在樣品中加入瓊脂營養(yǎng)培養(yǎng)基，在37℃下24 ~ 48 h后計數(shù)。這種方法精度高，但耗時長，難以滿足實際工作需要。為了簡化檢測程序，縮短檢測時間，國內(nèi)外學者對快速檢測方法做了大量研究，提出了一些檢測方法，如阻抗檢測法[1]、SIMPLETTM全平皿計數(shù)法[2]、微菌落技術[3-5]和紙片法[6-7]，取得了一些成果，但檢測時間仍在4小時以上。

　　本研究在分析現(xiàn)有研究成果的基礎上，提出了濾膜染色后直接檢測細菌總數(shù)的方法。具體步驟如下:用細菌收集器收集細菌→膜上染色→油鏡下計數(shù)→根據(jù)公式計算菌液濃度。實驗結果表明，該方法與傳統(tǒng)平板培養(yǎng)法無顯著差異，檢測時間約為1 h，是一種快速檢測細菌總數(shù)的方法。

　　2材料和方法

　　2.1材料

　　本研究使用的實驗材料為細菌收集器(杭州泰林生物技術設備有限公司)、染料、生物顯微鏡(寧波永新光學有限公司)和聚碳酸酯膜(直徑47 mm)。

　　2.2實驗方法

　　2.2.1準備工作取下集菌器的濾網(wǎng)(見圖1)，統(tǒng)計濾網(wǎng)上的總孔數(shù)，為計算菌液濃度做準備。此外，還需要對集菌器中的集菌器進行高壓滅菌，防止過濾過程中引入外來細菌。

　　2.2.2細菌收集300 ~ 500ml濃度的菌液，置于細菌收集器上，通過蠕動加壓對菌液施加壓力，使菌液流經(jīng)孔徑為0.45um的聚碳酸酯膜..采用過濾法是因為可以使細菌在濾膜上分布比較均勻，而選擇聚碳酸酯膜是因為其透光性好，便于用顯微鏡觀察。

　　2.2.3染色集菌后取下濾膜，切下一部分放在載玻片上染色固定。染色的目的是增加細菌與背景的對比，便于觀察。