近年來，市場上出現(xiàn)了許多自動細胞計數(shù)器。這種儀器使用了光學顯微鏡技術(shù)，但它帶來了更高的精度和可重復性，并將這種單調(diào)的工作自動化。小樣本量也是這種細胞計數(shù)器的另一個優(yōu)點。許多儀器使用一次性載玻片，只需要10-20 uL樣品。將載玻片插入自動細胞計數(shù)器，相機會捕捉圖像。然后內(nèi)置軟件分析圖像，顯示細胞數(shù)量等信息。

　　在這里，專家介紹了使用自動細胞計數(shù)器的三個技巧。

　　精確聚焦

　　與其他光學顯微鏡一樣，儀器的精確對焦對于計數(shù)非常重要。手動計數(shù)時，訓練有素的大腦可以輕松識別細胞。但是，自動細胞計數(shù)器中的攝像頭會檢測活細胞的亮中心和暗邊緣，并將其處理為黑白像素信息。如果細胞聚焦不準，亮中心會有明顯的灰度，會被誤認為死細胞。

　　大多數(shù)研究人員會發(fā)現(xiàn)，聚焦并不難，只要屏幕上顯示的圖像質(zhì)量與傳統(tǒng)顯微鏡相似。確保你有一個清晰的形象是很重要的。還有一點就是要了解細胞計數(shù)器中攝像頭的分辨率。如果自動細胞計數(shù)器以低幀速率顯示，例如低于每秒15幀，顯示的圖像將不會實時響應(yīng)聚焦旋鈕的微調(diào)。

　　控制幻燈片之間的差異

　　大多數(shù)基于圖像的自動細胞計數(shù)器使用具有清晰測量區(qū)域的一次性載玻片。該測量區(qū)域由物鏡的放大率和照相機的圖像傳感器的尺寸設(shè)定。這些細胞計數(shù)器通常測量0.4-0.5 uL的樣本，相當于4-5個大方塊的血細胞計數(shù)器。

　　與血細胞計數(shù)器不同，計數(shù)載玻片通常只使用一次。因此，載玻片之間的差異會顯著影響細胞計數(shù)的結(jié)果。對于某一組實驗，最好使用同一批載玻片，盡量避免這些差異。更改批號時，也建議使用標準微珠檢查載玻片。大多數(shù)細胞計數(shù)器制造商提供已知濃度的標準微珠。使用相同的微球樣品檢查不同的載玻片有助于發(fā)現(xiàn)差異。

　　評估軟件的集群性能

　　自動細胞計數(shù)儀的核心是進行分析的軟件，相當于人工計數(shù)時的人腦。大多數(shù)自動細胞計數(shù)器包含集成的軟件，可以精確地計數(shù)單細胞群體的數(shù)量。但是，當涉及到群集細胞的計數(shù)時，細胞計數(shù)器會有明顯的差異。由于培養(yǎng)細胞獲得的樣本并不總是單細胞群體，有時會有多個細胞團，自動細胞計數(shù)器的去團性能也需要仔細評估。當評估聚類性能時，可以執(zhí)行圖1的檢測。

　　圖一。將HL-60細胞加熱至70 ℃,處理20分鐘，并殺死以獲得死細胞樣品。然后，使用兩種不同的自動細胞計數(shù)器來檢測樣品。細胞計數(shù)后，根據(jù)軟件捕捉的圖像進行比較。紅圈:死細胞；藍圈:活細胞；黑色圓圈:排除的對象。

　　自動細胞計數(shù)器正在取代繁瑣的人工計數(shù)方法。了解一些基本原理，全自動細胞計數(shù)器會幫你得到好的結(jié)果。